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第三章 自然界里的微生物02（第1页）

第三章自然界里的微生物02

培养

细胞培养（特别是传代细胞）被支原体污染是个世界性问题。国内外研究表明，95％以上是以下四种支原体：口腔支原体、精氨酸支原体、猪鼻支原体和莱氏无胆甾原体，为牛源性。以上是最常见的污染细胞培养的支原体菌群，但能够污染细胞的支原体种类是很多的，国外调查证明，大约有二十多种支原体能污染细胞，有的细胞株可以同时污染两种以上的支原体。

支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染（一些支原体在人体是正常菌群）、培养基的污染、污染支原体的细胞造成的交叉污染、实验器材带来的污染和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。

组织细胞培养工作中，主要从以下几个方面来预防支原体的污染：控制环境污染；严格实验操作；细胞培养基和器材要保证无菌；在细胞培养基中加入适量的抗生素。支原体污染细胞后，特别是重要的细胞株，有必要清除支原体，常用方法有抗生素处理、抗血清处理、抗生素加抗血清和补体联合处理。支原体最突出的结构特征是没有细胞壁，一般来讲，对作用于细胞壁生物合成的抗生素，如内酰胺类、万古霉素等完全不敏感；对多粘菌素、利福平、磺胺药物普遍耐药。对支原体最有抑制活性及常用于支原体感染治疗的抗生素是四环素类、大环内酯类及一些氟喹诺酮；其他类抗生素如氨基糖苷类、氯霉素对支原体有较小抑制作用，所以常不用来作为支原体感染的化学治疗剂。

支原体有时被称为类菌质体。无细胞壁，多呈不规则球状、长丝状，可分支，营寄生共生或腐生。一般侵害对象为动植物，可造成多种疾病。

支原体是目前所能发现的能在无生命培基中生长繁殖的最小的微生物。支原体体形多样，基本为球形，亦可呈球杆状或丝状，其菌落呈针尖大小，故又称之为微小支原体。支原体特点是无细胞壁及前体，细胞器极少。DNA的C+C含量低，菌体内具有非常小的染色体组，其分子量约为45×108，菌体细胞大小约为O．2—0．3um，很少超过1．Oum。由三层蛋白质和脂质组成的膜样结构以及一层类似毛发结构组成。支原体由二分裂繁殖，形态多样。支原体用普通染色法不易着色，用姬姆萨．染色很浅，革兰氏染色为阴性。支原体可在鸡胚绒毛尿囊膜上或细胞培养中生长。用培养基培养，营养要求比细菌高。由于它没有细胞壁，因此对影响细胞壁合成的抗生素，如青霉素等不敏感，但红霉素、四环素、卡那霉素、链霉素、氯霉素等作用于核蛋白体的抗生素，可抑制或影响支原体的蛋白质合成，有杀伤支原体作用，支原体对热抵抗力差，通常55℃经15分钟处理可使之灭活。石炭酸，来苏儿易将其杀死。在培养基中置人脲素并以硫酸锰作指示剂极易与其他支原体作出鉴别。

它广泛分布于自然界，有80余种。与人类有关的支原体有肺炎支原体、人型

机理

支原体只能粘附在呼吸道或泌尿生殖道的上皮细胞表面的受体上，而不进入组织和血液。支原体引起细胞损害的原因为：粘附于宿主细胞表面的支原体从细胞吸收营养，从细胞膜获得脂质和胆固醇，引起细胞损伤；支原体代谢产生的有毒物质，如溶神经支原体能产生神经毒素，引起细胞膜损伤；脲原体含有尿素酶，可以水解尿素产生大量氨，对细胞有毒害作用。支原体除可以粘附于细胞、巨噬细胞表面外，还可以粘附于**表面，从而阻止**运动，其产生神经氨酸酶样物质可干扰**与卵子的结合。这就是支原体感染引起不育不孕的原因之一。

在动物实验发现，小鼠腹腔巨噬细胞可以杀灭支原体，而中性粒细胞的作用不大。在体外，IgCl和Igc2抗体有调理作用，可加强巨噬细胞对支原体的杀伤作用。

对比

L型细菌是在抗生素、溶菌酶等作用下变成的一种细胞壁缺陷型细菌，其许多特性与支原体相似，在鉴定时很有必要将二者区别开来。

支原体L型细菌

自然界中广泛存在绝大多数生长需胆固醇，在遗传上与细菌无关，且无论在什么条件下也不能变成细菌。菌落较小，0．1—0．3mm自然界很少存在生长不一定需要胆固醇。在遗传上与原菌相关，并可在诱导因素去除后回复为原菌。菌落稍大，0．5—1．0mm

肺炎支原体

肺炎支原体是人类支原体肺炎的病原体。支原体肺炎的病理改变以间质性肺炎为主，有时并发支气管肺炎，称为原发性非典型性肺炎。主要经飞沫传染，潜伏期2-3周，发病率以青少年最高。临床症状较轻，甚至根本无症状，若有也只是头痛、咽痛、发热、咳嗽等一般的呼吸道症状，但也有个别死亡报道。一年四季均可发生，但多在秋冬时节。

肺炎支原体的致病首先通过其顶端结构粘附在宿主细胞表面，并伸出微管插入胞内吸取营养、损伤细胞膜，继而释放出核酸酶、过氧化氢等代谢产生引起细胞的溶解、上皮细胞的肿胀与坏死。诱发机体产生的抗体也可能参与了上述病理损伤。呼吸道分泌的SlgA对再感染有一定防御作用，但不够牢固。

肺炎支原体的诊断方法主要依靠分离培养和血清学试验。标本可采可疑病人的痰或咽试子，接种于含血清或酵母浸膏的琼脂培养基。5—10天后观察有无直径30—100um的圆形房顶样菌落。多次传代后可变为典型的“荷包蛋”样菌落，并能吸附多种动物红细胞和气管上皮细胞、HeLa细胞等，且此类吸附可被特异性抗体所抑制。分离的支原体经形态、溶血与生化反应作初步鉴定后需进一步用特异性抗血清作生长抑制试验和代谢抑制试验。用患者血清与支原体脂质抗原作补体结合试验，恢复期较急性期效价高4倍以上具有诊断价值。亦可用间接免疫荧光试验、间接血凝EuSA检测标本。另外，有13—3／4患者的血清可与人O型红细胞在4℃时有非特异性凝集（称为“冷凝集试验”），37T时消失，患病一周时达到高峰。此方法简便，有助于诊断。

特点

支原体是目前所能发现的能在无生命培基中生长繁殖的最小的微生物。支原体体形多样，基本为球形，亦可呈球杆状或丝状，其菌落呈针尖大小，故又称之为微小支原体。能引起人类泌尿系感染的是解脲支原体和人型支原体。主要通过性接触传染，少数也可间接传染。泌尿系统是它的易感细胞。由于它没有细胞壁，因此对影响细胞壁合成的抗生素，如青霉素等不敏感，红霉素、四环素、卡那霉素、链霉素、氯霉素等作用于核蛋白体的抗生素，可抑制或影响支原体的蛋白质合成，有抑制支原体作用，但不能根治，不能使机体对其产生免疫抗体，容易反复，目前采用中药治疗可弥补这方面的缺陷。支原体是最小最简单的独立生活的原核生物。它没有固定形态，形态随环境而变化，在**中可呈球形、环形和丝状；它没有细胞壁，只有三层结构的细胞膜。解脲支原体（唯一确认的一种）具有尿素酶活性，能分解尿素。感染人体后，通过黏附于宿主细胞的受体上，引起细胞膜损伤，其代谢产物产生毒性作用。衣原体除可引起尿道炎、眼结膜炎外，还可引起附睾炎、前列腺炎、宫颈炎、**炎、输卵管炎及盆腔炎等。新生儿通过产道可被感染发生眼结膜炎、肺炎。男性同性恋者，可患直肠炎及咽炎。

第四节衣原体

简介

衣原体是一种既不同于细菌也不同于病毒的一种微生物，属于原核生物，即细胞内没有形成核膜的细胞核。衣原体与细菌的主要区别是其缺乏合成生物能量来源的ATI?’酶，也就是说衣原体自己不能合成生物能量物质ATP，其能量完全依赖被感染的宿主细胞提供。而衣原体与病毒的主要区别在于其具有DNA、RNA两种核酸、核糖体和一个近似细胞壁的膜，并以二分裂方式进行增殖，能被抗生素抑制。衣原体属于原核类生物。

名称和分类

衣原体以鹦鹉热病原体和沙眼病原体为代表的专性寄生性的微生物。最早是由宫川米次等（1935年）从腹股沟淋巴肉芽肿患者的染色体中作为宫川小体而发现的，被命名为宫川氏体（E．Brumpt，1938年）。其后，相继又出现很多其他名称，例如作为立克次氏体的亲缘种被称为Rickettsiaformis、sia等，也有作为病毒类而称之为鹦鹅热和腹股沟淋巴肉芽肿病毒、鹦鹉热病毒群等，相当混乱。现在已按伯杰式分类法归为衣原体目（Chlamidiales，LA．Pagei等，1971年）。然而目前尚有许多不明之处。浸染粒子呈直径0．3微米的球形，可用光学显微镜看到；在被细胞壁和细胞膜包裹的细胞质中有核糖体；核酸同时含有DNA和RNA；已证明有葡萄糖代谢活性和蛋白质合成能力；在细胞液胞内增殖，不进入细胞质质内。浸染粒子通过吞噬作用进入细胞液胞内，转化成一般称为网状结构体的粒子。网状结构体通过分裂增殖，在浸染后期成熟为浸染粒子。因此，在增殖周期中，虽没有保持作为粒子的连续性的潜伏期，然而，由于没有证实网状结构体的浸染性，所以从外表看起来，有一个相当于潜伏期的时期。为此，如上所述，直到最近仍作为病毒进行分类。

生活史

衣原体有两种存在形态，分别称为原体和始体。原体有感染力，它是一种不能运动的球状细胞。原体逐渐伸长，形成无感染力的个体，称为始体，这是一种薄壁的球状细胞，形体较大。

。衣原体的类型和相关疾病

已知的与人类疾病有关的衣原体有三种，分别是鹦鹉热衣原体、沙眼衣原体和肺炎衣原体。这三种衣原体均可引起肺部感染。鹦鹉热衣原体可通过感染有该种衣原体的禽类，如鹦鹉、孔雀、鸡、鸭、鸽等的组织、血液和粪便，以接触和吸人的方式感染给人类。沙眼衣原体和肺炎衣原体主要在人类之间以呼吸道飞沫、母婴接触和性接触等方式传播。

衣原体感染的实验室检查

1．衣原体细胞培养：对沙眼衣原体敏感的细胞株为：McCoy细胞、Hela—229细胞和BHK细胞，最常用的是经放线菌酮处理的单层．McCoy细胞，孵育后，用单克隆荧光抗体染色，可迅速诊断，但操作人员一定要熟练，需专业培养。培养法的敏感性为80％—90％，阳性即可确立诊断。

2．衣原体细胞学检查法：在感染细胞内可有衣原体的包涵体存在。从感染部位采取细胞标本作涂片，姬姆萨染色包涵体是蓝色或暗紫色，碘染色显示褐色。但敏感性差（40％），目前已较少采用。

近年来采用荧光素标记的抗衣原体单克隆抗体，来检测细胞涂片中的衣原体，使用较为方便，目前主要用衣原体外膜蛋白的单克隆抗体的商品试剂。结果判断：要衣原体数10个才能判为阳性。

衣原体特征

衣原体是一类在真核细胞内专营寄生生活的微生物。研究发现这类微生物具有和革兰氏阴性细菌很多相似。

这些特性是：

1．有DNA和RNA两种类型的核酸；

2．具有独特的发育周期，类似细菌的二分裂方式繁殖；

3．具有粘肽组成的细胞壁；